紫杉醇是紅豆杉中主要活性成分,是萜類環(huán)狀結(jié)構(gòu)的天然次生代謝衍生物。因其含量低、結(jié)構(gòu)類似物較多、純度要求高、分離過程中易轉(zhuǎn)化等因素,給提取、分離和測定帶來了較大的困難。如何以低成本和簡單的工藝提取紫杉醇,將紫杉醇與其類似物分離,獲得純度較高的紫杉醇產(chǎn)品,并對其進(jìn)行精確的測定就成為研究的重點(diǎn)。
常用的提取方法有:甲醇有機(jī)溶劑萃取法、乙醇有機(jī)溶劑萃取法等。萃取又可分為初級萃取和次級萃取,在這兩級萃取過程中,溶劑的選擇具有重要影響。
常用的純化方法有:正相柱色譜法和反相色譜法主要包括常壓和低壓柱層析、干柱層析等法,以及一些較先進(jìn)的分離手段如高速逆流色譜等。
目前有關(guān)紫杉醇類物質(zhì)的提取方法,大多采用有機(jī)溶劑對紅豆杉原料多次浸提,浸提液回收后再用有機(jī)溶劑萃取,再經(jīng)層析分離后結(jié)晶得到紫杉醇。這些方法存在最大問題是提取收率低且設(shè)備昂貴,并且造成了巨大的資源浪費(fèi),提高了生產(chǎn)成本,存在較大環(huán)保問題。
具體提取步驟為:
取紅豆杉原料研磨過100至200目篩,向其中加入5至10倍量的水及百分之零點(diǎn)一的冰醋酸,加纖維素酶于超聲下酶解2至5小時(shí);加入等體積的有機(jī)溶劑,超聲萃取0.5至2小時(shí);靜置過濾分液,水相用有機(jī)溶劑萃取2到3次,合并有機(jī)相;減壓除去有機(jī)溶劑,所得浸膏與等質(zhì)量中性氧化鋁拌樣,過200至300目硅膠或氧化鋁層析柱,石油醚和乙酸乙酯洗脫除去脂溶性雜質(zhì),再以醇與乙酸乙酯混合液洗脫,監(jiān)測,收集醇與乙酸乙酯流份;減壓除去醇與乙酸乙酯,所得粗品依次經(jīng)弱堿性樹脂柱和強(qiáng)堿性樹脂柱,二氯甲烷與丙酮混合液洗脫,得到純品;純品再經(jīng)重結(jié)晶精制。